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Unité des Aspergillus

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Technicité

Les techniques suivantes, employées dans le laboratoire, utilisent exclusivement Aspergillus fumigatus comme espèce:

 Techniques mycologiques
Culture du champignon en fermenteur en conditions controlées.

 Techniques de biologie moléculaire
Clonage et disruption de gènes par intégration d'un marqueur de résistance ou d'auxotrophie.
Quantification de l'expression d'un gène par PCR quantitative.
Expression hétérologue et étiquetage de protéines de A. fumigatus.
Obtention de mutants par repression d'un gène par la méthode RNAi.

 Techniques biochimiques et immunologiques
Extraction et purification chromatographique de peptides, protéines et polysaccharides.
Localisation, identification, caractérisation des protéines par méthodes biochimiques et immunochimiques.
Techniques classiques de caractérisation des structures glucidiques libres ou conjuguées.
Production d'anticorps dirigés contre des antigènes fongiques protéiques et polysaccharidiques.

 Techniques de biologie cellulaire
Cultures de macrophages alvéolaires (cellules primaires humaines et murines, lignée cellulaire MHS),
Etude de la phagocytose (internalisation, trafic intracellulaire, "killing" des conidies) par immunofluorescence (double marquage).

pb  Expérimentation animale
Etude de la pathogénicité de souches de Aspergillus fumigatus chez la souris (inoculations par voies intranasale ou intratrachéale),
Production d'anticorps chez le lapin et la souris (inoculations par voie intranasale, intradermique, intraveineuse, intramusculaire, d'antigènes protéiques ou polysaccharidiques ou d'ADN).

   Ultrastructure et immunocytochimie en microscopie électronique à transmission et à blayage.

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