DEVELOPPEMENT LYMPHOCYTAIRE

Développement des cellules B lors de l’embryogenèse

Les résultats décrits précédemment confirment notre hypothèse selon laquelle la lymphopoïèse du foie fœtal (FF) et de la moelle osseuse (MO) suit des voies distinctes, ce qui pourrait indiquer que les CSH présentes dans la P-Sp/AGM, le foie fœtal et la moelle osseuse sont des types cellulaires distincts et produits de façon indépendante. Nous pouvons aussi émettre l’hypothèse que les CSH dérivées de la P-Sp/AGM passent dans le foie fœtal puis dans la MO. Cette transition ainsi que la diversité conséquente des signaux reçus de l’environnement stromal différent conditionneraient la réponse des précurseurs aux facteurs de croissance. Pour distinguer les deux possibilités, nous analyserons :

Les fréquences de CSH répondant au TSLP et au ligand Fl2/Flt3 présentes dans la P-Sp/AGM, le foie fœtal et la MO comparées à la réponse à l’IL-7. Cette expérience nous permettra de confirmer la plus large réactivité des précurseurs embryonnaires vis-à-vis du modèle de réponse plus restreint dans leur contrepartie adulte.

La fréquence des CSH répondant au TSLP et au ligand Flk2/Flt3, isolées de receveurs transplantés avec des CSH de P-Sp/AGM. Cette expérience testera la possibilité qu’il y ait des productions de CSH indépendantes ou des changements dans la réactivité lorsque des précurseurs hématopoïétiques d’origine embryonnaire passent vers la MO.

La souris adulte IL-7-/- présente des taux indétectables de cellules CD19+ dans la MO. L’expression de CD19 est contrôlée par le facteur de transcription Pax-5, responsable de l’engagement irréversible des précurseurs dans la voie de différentiation du lignage B. Cette observation suggère que l’IL-7 joue un rôle aux stades précédant l’engagement du lignage. La diminution et l’éventuelle disparition des précurseurs B engagés, dans la MO de souris IL-7 -/-, contrastent avec le nombre constant de précurseurs T dans le thymus tout au long de la vie. Cette observation indique que les précurseurs de MO atteignent le thymus à un taux identique. Nous analysons actuellement les différents compartiments de progéniteurs lymphoïdes communs (CLP) chez les souris IL-7-/-, à différents ages et déterminons si l’absence de cellules de lignée B est en rapport avec l’absence de CLP. Une donnée préalable indique que le nombre de CLP présents dans la MO de souris IL-7-/- diminue avec l’age selon une courbe qui ressemble à celle des précurseurs de cellules B dans la MO. Ce résultat indique qu’un autre précurseur que le CLP est responsable de l’apport thymique chez ces animaux. Nous caractérisons actuellement différentes fractions des cellules de MO et par une approche combinée in vitro et in vivo nous identifions la nature des migrants thymiques en l’absence d’IL-7. Ces expériences éclairciront le rôle des interleukines dans l’engagement du lignage hématopoïétique.

Développement cellulaire T

Les cellules T ab et gd sont produites dans le thymus tout au long de la vie. Les lois qui régissent le développement de ces deux types cellulaires demeurent mal définies bien que l’on sache que les cellules T ab peuvent se développer en l’absence d’IL-7 et ont besoin de l’activation de Notch 1, alors que les cellules T gd sont absentes chez les souris IL-7-/- en raison d’une altération dans le processus de réarrangement. De plus, nous avons déterminé que certaines sous-populations de cellules T gd qui produisent de l’IL-4 et expriment de faibles taux du marqueur Thy1 sont oligoclonales et sont produites de façon préférentielle lors de la vie foetal et néonatale (Azuara et al J. Immunol 165:42, 2000 – Grigoriadou et al J. Immunol. 169:3736, 2002). Pour mieux définir les lois qui conditionnent le développement de cette sous-population et les signaux impliqués dans l’engagent ab vis-à-vis de celui de gd nous avons récemment obtenu la lignée cellulaire OP9 qui exprime de manière constitutive le ligand Notch 1 (delta-like-1) ce qui permet le développement de lymphocytes T ab et gd T à partir de précurseurs non engagés, in vitro. Nous avons également à notre disposition des cellules OP9 qui expriment constitutivement delta 4, un autre ligand Notch 1. Ce système (que nous avons déjà validé dans le laboratoire) nous permettra de tester le rôle des différents signaux et cytokines dans le développement cellulaire T. Cette étude sera complétée par des tests sur le développement T dans des culture d’organes thymiques foetaux et des reconstitutions in vivo par des greffes de lobes thymiques embryonnaires de souris sauvages et mutantes (des interleukines et des ligands de Notch 1) chez des receveurs adultes.