LABORATOIRE DE PRÉDÉVELOPPEMENT DES SONDES

Responsable
GUESDON Jean-Luc

e-mail : guesdon@pasteur.fr


Centre de Biologie Médicale Spécialisée
Institut Pasteur
25/28 Rue du Dr. Roux
75724 PARIS Cedex 15

Tél
01 4568 8633
Fax
01 4568 8982

Secrétariat

ANTUNES Maria, IP
01 4568 8302

Chercheurs permanents

GUESDON Jean-Luc, IP

Stagiaires de recherche

OPRISAN Gabriela, Chercheur Institut Cantacuzène Bucarest
BARAIGE Fabienne, stage de formation

Ingénieurs Techniciens Administratifs

BOUIGE Philippe, IP
CASADEMONT Isabelle, IP
CHEVRIER Danièle, IP

L'activité du Laboratoire de Prédéveloppement des Sondes est exclusivement une activité de Recherche Appliquée. Il est le laboratoire de Recherche et Développement du Centre de Biologie Médicale Spécialisée (CBMS). Ses missions sont de mettre au point de nouvelles méthodes et techniques de diagnostic fondées sur l'utilisation des sondes nucléiques ou immunologiques non radioactives et d'améliorer les méthodes existantes en les rendant plus sensibles, plus spécifiques ou mieux adaptées à une activité de routine. Pour remplir ses missions le Laboratoire établit des collaborations avec des Unités de l'Institut Pasteur ou d'autres organismes de Recherche.



Hybridation moléculaire non radioactive sur microplaque

(Responsable non identifié)

Nous avons développé une méthode spécifique et quantitative pour la détection des fragments d'ADN obtenus par la technique PCR. Cette méthode, fondée sur le principe de l'hybridation moléculaire de type sandwich, utilise une sonde de capture immobilisée sur des microplaques, une sonde de détection marquée chimiquement par la biotine et une solution de référence constituée de fragments d'ADN obtenus par une PCR optimisée puis purifiés par chromatographie sur un échangeur d'anions à haute pression. Cette méthode a été appliquée dans notre laboratoire à la détection de Salmonella enterica, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, Mycobacterium genavense, Campylobacter fetus, Bordetella pertussis. Nous adaptons cette technique au dosage des ARNm humains codant pour certaines cytokines.

Recherche de séquences d'acide nucléique spécifiques de bactéries pathogènes

(Responsable non identifié)

Sondes pour la détection de Mycobacterium tuberculosis. Les techniques de biologie moléculaire fondées sur la détection d'ADN cible (hybridation non radioactive, PCR) sont de plus en plus utilisées pour réaliser le diagnostic rapide de la tuberculose. Plusieurs séquences cibles ont été décrites et utilisées en biologie médicale, la séquence la plus employée aujourd'hui est la séquence IS6110. Cependant certaines souches de Mycobacterium tuberculosis ne possèdent pas cette séquence. Pour permettre de détecter ces souches particulières nous avons mis au point une technique d'hybridation moléculaire non radioactive fondée sur l'utilisation d'un gène récemment isolé dans notre laboratoire (gène p27) et présent dans tous les isolats de Mycobacterium tuberculosis. Sondes pour la détection de Mycobacterium genavense. Mycobacterium genavense est une bactérie opportuniste identifiée récemment, elle peut causer une infection disséminée chez des patients atteints du SIDA. On estime que M. genavense est responsable de plus de 10 % des infections mycobactériennes non tuberculeuses. L'identification de cette bactérie par les techniques bactériologiques classiques est difficile, elle pousse très lentement dans des milieux liquides et ne poussent pas sur les milieux solides. A partir d'une banque génomique, nous avons trouvé une séquence d'ADN spécifique de M. genavanse qui nous a permis de développer une méthode d'identificaton fondée sur la technique PCR et l'hybridation moléculaire non radioactive.

Mise au point d'un dosage immunologique de la 5HT moduline.

(Responsable non identifié)

Le peptide Leu-Ser-Ala-Leu, isolé et caractérisé par les chercheurs de l'Unité de Pharmacologie Neuro-Immuno-Endocrinienne et nommé 5HT moduline contôle l'activité de l'un des récepteurs (autorécepteur 5HT1B) de la sérotonine (5-hydroxy-tryptamine). Le système sérotoninergique est un sytème de neurotransmission qui joue un rôle important dans plusieurs mécanismes d'adaptation de l'organisme à son environnement. Il est impliqué dans de nombreuses fonctions physiologiques (sommeil, température, appétit, locomotion, comportement de peur, fuite, agressivité, émotions, apprentissage et mémoire, sécrétions hormonales, etc.) et dans la régulation de fonctions cardio-vasculaires, de fonctions digestives et aussi du système immunitaire. Par conséquent il est impliqué dans divers désordres psychiatriques : stress, anxiété, phobies, agressivité, violence, dépression, suicide, schizophrénie, etc. Le peptide 5-HT moduline apparaît comme un facteur important qui permet de régler le niveau de régulation sérotoninergique sur d'autres fonctions. Il joue donc un rôle physiologique à de nombreux niveaux et le dysfonctionnement des mécanismes dans lesquels il est impliqué est vraisemblablement à l'origine de divers désordres psychiatriques. Il est donc important de pouvoir le quantifier dans les liquides biologiques (sang, liquide céphalo-rachidien) soit pour faciliter le diagnostic de tels désordres, soit pour suivre l'effet de traitements thérapeutiques. Le Laboratoire de Prédéveloppement des Sondes met au point une méthode de dosage enzymo-immunologique du peptide 5-HT moduline et évaluera l'intérêt de ce dosage comme outil de diagnostic.



The laboratory "Prédéveloppement des Sondes" is involved in Recherche and Development (R & D) activity within "Centre de Biologie Médicale Spécialisée". The aims of the laboratory are to develop and set up new diagnostic methods and techniques involving non-radioactive nucleic or immunological probes and to improve the existing methods in order to make them more sensitive, more specific or more adapted to the routine activity of medical biology. In order to fulfil its charge the laboratory establishes collaborations with Rechearch Units of Pasteur Institute or with other Rechearch Institutions.