Production de Protéines recombinantes et d'anticorps (Plate-forme)


  RESPONSABLEDr BÉGUIN Pierre / beguin@pasteur.fr
  MEMBRESDr BELLALOU Jacques / Dr BONDET Vincent / FRACHON Emmanuel
Dr NATO Faridabano / PÊTRES Stéphane

  Rapport d'activité

La Plate-forme a pour mission de produire et purifier des protéines recombinantes et des anticorps monoclonaux. Elle comporte trois modules :

1. Production de protéines recombinantes dans des systèmes microbiens.

Ce module réalise des cultures bactériennes en fioles agitées, en fermenteurs classiques de 2 et 15 litres, ainsi que dans une batterie de microfermenteurs conçue et mise au point au laboratoire pour l'exécution de cultures parallèles en conditions contrôlées (Figure 1). L'appareil est équipé d'un système optique permettant desuivre en ligne de la densité optique des cultures.

En plus des cultures en conditions standard, une large part de l'activité du module consiste à optimiser la production de protéines "difficiles" synthétisées en faible quantité ou sous forme insoluble.

2. Production de protéines recombinantes en cellules d'insectes.

La Plate-forme offre également la possibilité de produire des protéines recombinantes en cellules de Spodoptera frugiperda infectées par des baculovirus recombinants ou en lignées transformées stables de cellules de Schneider de Drosophila melanogaster. En ce qui concerne le système baculovirus, le module effectue la construction du virus à partir d'un vecteur de transfert ainsi que la production de stocks à haut titre. La demande pour ce genre de service est en forte croissance, particulièrement pour les protéines d'eucaryotes supérieurs, telles que les protéines de parasites ou de virus, qui ne peuvent être produites de façon adéquate sous forme active dans des systèmes bactériens.

3. Production d'anticorps monoclonaux

Le module utilise la technique classique de Kohler et Milstein pour produire des anticorps monoclonaux de souris dirigés contre les antigènes fournis par les demandeurs. Les anticorps sont caractérisés en ce qui concerne le sous-type d'immunoglobuline et la constante de dissociation. La cartographie de épitopes reconnus peut être réalisée si les antigènes appropriés sont fournis par le demandeur.

Le module gère actuellement une douzaine de projets à divers stades d'avancement. Environ 6-7 projets impliquent la production d'anticorps monoclonaux pour la recherche. Un des projets vise à obtenir des anticorps neutralisant les toxines botuliques. Les autres projets concernent le développement de tests d'immunochromatographie sur bandelettes pour la détection d'antigènes spécifiques de pathogènes dans les fluides biologiques. Ces tests permettent le diagnostic rapide des diarrhées sanglantes, des méningites, de la peste et de la malaria

Gestion des projets

Les projets à court terme (<1-2 semaines) sont traités au fur et à mesure; les projets plus longs sont soumis à l'approbation du Comité de Pilotage. Les demandeurs contribuent au budget de la Plate-forme à hauteur du coût de fonctionnement du projet.

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FIGURE 1. Vue générale de la batterie de microfermenteurs

Figure 1. General view of the micro-fermentor battery.



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