Cristallogenèse et Diffraction des rayons X (Plate-forme)


  RESPONSABLEDr HAOUZ Ahmed / ahaouz@pasteur.fr
  MEMBRESBENHARRATS Hind / NAVAZA Raphael

  Rapport d'activité

L’ objectif de la plate-forme 6 est de mettre à la disposition des unités de recherche travaillant en cristallographie des macromolécules à l’Institut Pasteur, des équipements pour la cristallogenèse robotique, l'informatique et la diffraction des rayons X. En parallèle à cette activité de service, la plate-forme développe des méthodologies à haut débit pour le clonage et la cristallisation, grâce à l'automatisation et à la miniaturisation des différentes étapes du processus, pour permettre la réalisation des projets de génomique structurale.

Par le soutien du Réseau National des Génopoles, des contrats européens SPINE et X-TB, et de l'Institut Pasteur, nous avons entrepris depuis l’année 2002, un projet de génomique structurale de mycobactéries. Dans ce domaine, plus de 535 gènes mycobactériens ont été clonés dans des vecteurs d'expression bactérienne, plusieurs protéines purifiées ont été soumises à des essais de cristallisation. A ce jour, plus de vingt deux structures tridimensionnelles ont été déterminées à haute résolution.

Durant cette année, nous avons démarré trois mini projets de génomique structurale (5 à 10 gènes selon les projets) sur des gènes à fonction inconnue de Yersinia pestis, de Chlamydia, et de Trypanosoma cruzi. La majorité de ces gènes sont maintenant clonés et la purification des protéines solubles est en cours de réalisation. En dehors de ces projets de génomique structurale, la plate-forme a répondu à plusieurs demandes de cristallogenèse de macromolécules biologiques provenant des unités de recherche internes et externes au campus de l’Institut Pasteur. Plus d’une dizaine de projets ponctuels ont été soumis dont au moins un tiers a été couronné de succès par l’obtention d’une piste de cristallisation.

En terme de service, la plate forme a criblé les conditions de cristallogenèse pour plus d’une centaine d’échantillons protéiques issus des unités de recherche travaillant en cristallographie des macromolécules à l’Institut Pasteur.

Dans le cadre du développement technologique, nous avons acquis cette automne un nouveau robot ( Matrix Maker de chez Emerald BioSystemes). Cet équipement, capable de générer des solutions de cristallisation à partir de soixante solutions mères, est en cours de validation sur la plate forme. Au début de l’année 2007, ce nouvel automate, permettant l’amélioration de la qualité des cristaux, sera mis à la disposition des équipes de cristallographie internes et externes au campus de l’institut Pasteur.

Mots-clés: Génomique structurale, clonage expression, purification de protéine, Cristallogenèse robotique, Diffraction des rayons X, LIMS

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Quelques cristaux de protéines à fonction inconnue obtenus dans le cadre du projet de génomique structurale des mycobactéries.

Some crystals of mycobacterial proteins obtained at the PF6.



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