Cytométrie (Plate-forme)


  RESPONSABLEBALAZUC Anne-Marie / abalazuc@pasteur.fr
  MEMBRESLOUISE Anne

  Rapport d'activité

La plate-forme de cytométrie (PFC) propose, sous forme de prestations de service, des analyses et tris de cellules. Les techniques utilisées sont la cytométrie en flux, la cytométrie en image, la microscopie confocale, le tri à l'aide d'anticorps couplés à des billes magnétiques. Elle participe également au développement et à l'optimisation de ces techniques, ainsi qu'à la formation des équipes intéressées.

Fonctionnement

Notre activité est essentiellement basée sur des analyses (en flux ou en image) et des tris de cellules, sous forme de « prestations de service » à la demande des équipes de recherche.

Un entretien préalable nous permet d’arrêter avec nos « clients » le protocole de préparation des cellules et de planifier la manipulation.

Nous les aidons si nécessaire à interpréter leurs résultats…

Selon la complexité de l’appareil, celui-ci est manipulé par nos expertes ou mis à la disposition des utilisateurs en « libre-service ».

Dans ce dernier cas, une formation obligatoire est préalablement organisée par la PFC.

Objectifs

Animer et gérer la dynamique de groupe initiée avec les utilisateurs de la PFC.

Améliorer l’organisation pour gagner en efficacité et en disponibilité.

Développer en collaboration avec les fournisseurs des outils pour répondre aux demandes du campus. (Mise au point des expertises sur du matériel pathogène, tri en 6 couleurs à 4 voies, analyses complexes sur plus de 9 couleurs…)

Adapter les formations au matériel récemment acquis.

Travailler avec les services support de l’Institut Pasteur comme l’Hygiène et Sécurité, la Qualité, la Santé au Travail et la Logistique pour améliorer nos performances.

Equipements

Nos équipements (un cytomètre en image à balayage laser, 2 trieurs de cellules, 5 analyseurs) permettent de réaliser notamment du tri à haute vitesse, en séparant simultanément 4 sous populations cellulaires. Les analyseurs sont équipés de façon complémentaire permettant de mesurer des signaux fluorescents avec excitation laser UV 325 nm, violet 405 nm, bleu 488 nm et rouge 630 nm.

Conclusions

Une quarantaine d'équipes, issues très majoritairement de l'Institut Pasteur bénéficient de ces services (5000 analyses et 300 tris environ). Les expériences portent principalement sur la détection d'anticorps membranaires (entre 3 et 9 fluorescences mesurées simultanément, selon l'appareil utilisé), la mesure de flux calciques, l'étude du cycle cellulaire, du FRET et de l'apoptose.

La plate-forme propose régulièrement des formations pratiques chaque mois, dont bénéficient chaque année une centaine de personnes.

L’équipe interagit avec des ressources internes et externes pour améliorer son efficacité : identifier de nouveaux appareils, apporter des réponses adaptées aux besoins du Campus…

Perspectives

La PF qui fournit un grand nombre de prestation, évolue à la mesure de ses ressources humaines pour répondre aux besoins des chercheurs en accord avec la politique scientifique de l’Institut Pasteur:

En identifiant et testant de nouveaux fluorochromes (par exemple Alexa 350)

Par l'introduction ou la mise au point de nouvelles méthodologies impliquant la cytométrie.

Par la prise en charge d’expertises de plus en plus complexes et/ou sur du matériel pathogène, l’équipe s’investit dans la mise au point de tri et d’analyse de bactéries et virus..

En améliorant :

La qualité pour valider les données brutes.

H&S pour assurer les expertises sur des échantillons pathogènes et notamment améliorer notre gestion des risques.

Notre organisation logistique pour faciliter l’utilisation de la Plate-forme.

Mots-clés: fluorescence, cytometrie, analyse de cellules, tri de cellules, services



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