Unité: Analyse et microséquençage des protéines (Plate-forme)

Responsable: d’Alayer Jacques

La Plate-forme a deux activités :

le microséquençage chimique des protéines et l'analyse des protéines au moyen de la technologie des " ProteinChip arrays " de Ciphergen (technologie qui combine la capture des protéines sur différentes surfaces chimiques et l'analyse par spectrométrie de masse de type MALDI-TOF.

Ces activités sont réalisées tant au bénéfice de l'Institut Pasteur qu'au bénéfice des laboratoires extérieurs.

Le microséquençage des protéines est resté l'activité la plus importante. La détermination des séquences est faite, soit à partir de protéines et peptides purifiés ou partiellement purifiés, soit à partir de fragments internes de ces molécules. Fragments internes obtenus par coupure enzymatique et purifiés par chromatographie de type HPLC. Les séquences sont ensuite déterminées par séquençage automatique selon la méthode chimique décrite par Edman. Les deux séquenceurs utilisés, de marque Applied Biosystems, sont un ABI 473A et un ABI 494. Une activité de conseil pour la préparation des échantillons est aussi proposée.

Au cours de l'année, 380 échantillons ont été analysés pour 67 laboratoires dont 32 laboratoires extérieurs (31 % des échantillons).

L'analyse des peptides et protéines par capture sur différentes surfaces chimiques et leur analyse par spectrométrie de masse (SELDI-TOF-MS) de Ciphergen (http://www.ciphergen.com) suscite un intérêt croissant à l'Institut et des cours théoriques et pratiques ont été organisés.

La diversité des analyses possibles, la sensibilité et la rapidité en font une technique de choix.

Par exemple: l'analyse de l'expression différentielle de protéines (découverte et validation de biomarqueurs), l'analyse d'interactions moléculaires spécifiques, l'aide à la purification, la caractérisation et l'identification de protéines, la recherche de site de phosphorylation, etc …

Mots-clés: Protéines, microséquençage, ProteinChip, Ciphergen, spectrométrie de masse


Rapports d'activité 2005 - Institut Pasteur
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