Unité: Cytométrie (Plate-forme)

Responsable: Anne-Marie Balazuc

La plate forme de cytométrie (PFC) propose, sous forme de prestations de service, des analyses et tris de cellules. Les techniques utilisées sont la cytométrie en flux, la cytométrie en image, la microscopie confocale, le tri à l'aide d'anticorps couplés à des billes magnétiques. Elle participe également au développement et à l'optimisation de ces techniques, ainsi qu'à la formation des équipes intéressées.

La plate forme de cytométrie est intégrée à l'Imagopole.

Organisation actuelle

Marie-Christine W agner: responsable du pôle d‘analyse par cytométrie en flux.

Elle assure le suivi méthodologique et technologique des analyseurs, développe les formations à l'acquisition-analyse en fonction de l'évolution du parc des cytomètres qui répond aux objectifs de performance de la PFC. Elle collabore avec les utilisateurs qui souhaitent bénéficier de son expertise soit pour interpréter leurs résultats, soit pour mettre au point leurs analyses.

Anne Louise : responsable du pôle " tri cellulaire ".

Elle réalise des expertises sur le MOFLO (DAKOCytomation), trieur haute performance et forme les utilisateurs des autoMACS pour des tris cellulaires par billes magnétiques. Elle assure également le suivi méthodologique et technologique du trieur en relation avec les fournisseurs (qualification des équipements) et les utilisateurs (interaction scientifique pour la mise au point des expertises).

Hélène Kiefer-Biasizzo : responsable du développement d'expertise sur des échantillons pathogènes.

Experte en cytométrie en flux, elle réalise des tris cellulaires sur l'Aria (trieur haute performance qui vient d'être acquis par la PFC) ; et en cytométrie en image, elle fournit des analyses d'échantillons fixés. Elle assure la maintenance des autoMACS et la partie théorique de la formation à l'analyse.

AMB : Responsable de la plate-forme

Elle encadre l'équipe et la mobilise sur les objectifs définis en fonction des besoins du campus. Elle assure la gestion des moyens financiers et humains ; planifie les activités de la plate-forme ;communique sur les prestations de la PF vers les utilisateurs. Elle gère la résolution de problème par le biais de la démarche Qualité qu'elle a initiée sur la PFC.En charge de l'organisation des expertises sur échantillons pathogènes, elle a piloté l'acquisition du nouveau trieur FACS Aria et de l'enceinte PSM de type II permettant la réalisation de ces nouvelles activités.

Notre activité est essentiellement basée sur des analyses (en flux ou en image) et des tris de cellules, sous forme de " prestations de service " à la demande des équipes de recherche.

Un entretien préalable nous permet d'arrêter avec nos " clients " le protocole de préparation des cellules et de planifier la manipulation. Nous les aidons si nécessaire à interpréter leurs résultats… Selon la complexité de l'appareil, celui-ci est manipulé par nos expertes ou mis à la disposition des utilisateurs en " libre-service ". Dans ce dernier cas, une formation obligatoire est préalablement organisée par la PFC.

Objectifs

Animer et gérer la dynamique de groupe initiée avec les utilisateurs de la PFC. Améliorer l'organisation pour gagner en efficacité et en disponibilité. Développer en collaboration avec les fournisseurs des outils pour répondre aux demandes du campus. (Mise au point des expertises sur du matériel pathogène, tri en 6 couleurs à 4 voies, analyses complexes sur plus de 9 couleurs…) S'intégrer au sein de l'Imagopole : pour mieux définir nos fonctions sur le plan scientifique, technique, d'ingénierie et de service…

Conclusion

Nos équipements (un cytomètre en image à balayage laser, 3 trieurs de cellules, 5 analyseurs, un microscope confocal) permettent de réaliser notamment du tri à haute vitesse, en séparant simultanément 4 sous populations cellulaires. Les analyseurs sont équipés de façon complémentaire permettant de mesurer des signaux fluorescents avec excitation laser UV 325 nm, violet 405 nm, bleu 488 nm et rouge 630 nm.

Une quarantaine d'équipes, issues très majoritairement de l'Institut Pasteur bénéficient de ces services (5000 analyses et 300 tris environ). Les expériences portent principalement sur la détection d'anticorps membranaires (entre 3 et 9 fluorescences mesurées simultanément, selon l'appareil utilisé), la mesure de flux calciques, l'étude du cycle cellulaire, du FRET et de l'apoptose.

La PF qui fournit un grand nombre de prestation, évolue à la mesure de ses ressources humaines pour répondre aux besoins des chercheurs : En identifiant et testant de nouveaux fluorochromes (par exemple Pacific blue ou Cascade yellow). l'introduction ou la mise au point de nouvelles méthodologies impliquant la cytométrie. Tri de plus en plus complexes (6 couleurs, 4 voies) et tri de matériel pathogène.

La plate-forme propose régulièrement des formations pratiques chaque mois, dont ont bénéficié cette année 100 personnes. De nouvelles formes de stages, adaptées au matériel récemment acquis sont régulièrement développées.

Mots-clés: fluorescence, cytometrie, microscopie confocale, analyse de cellules, tri de cellules


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