Unité: Génétique moléculaire des Bunyaviridés

Responsable: Bouloy Michèle

L'activité principale de l'Unité porte sur l'étude du virus de la fièvre de la vallée du Rift qui représente un modèle de fièvre hémorragique virale. Nous cherchons à identifier le(s) facteur(s) de virulence et comprendre leur mécanisme d'action pour produire un virus non pathogène, utilisable comme vaccin ou des molécules à visée thérapeutique.

le rôle de l'interféron et de la protéine NSs dans la pathogenèse

Le virus de la fièvre de la vallée du Rift (VFVR) est un arbovirus de la famille des Bunyaviridae (genre Phlebovirus) transmis par les moustiques. Il est endémique en Afrique sub-tropicale où il provoque de nombreuses épizooties et épidémies. Récemment, il s'est propagé au Moyen-Orient. Les ruminants sont très sensibles, les jeunes meurent dans de très brefs délais, les femelles avortent ou donnent naissance à des fœtus mal-formés. Chez l'homme, l'infection peut conduire à une forme hémorragique mortelle avec hépatite aiguë. La fonction de la protéine non structurale NSs est restée longtemps ignorée. Cette protéine phosphorylée forme des filaments nucléaires alors que tout le cycle viral se déroule dans le cytoplasme. L'étude de cette protéine constitue l'axe principal de nos recherches. L'analyse génétique du mutant avirulent Clone 13 dont la protéine NSs est délétée de 70%, a permis de mettre en évidence le rôle majeur de NSs dans la virulence et de montrer que NSs bloque la réponse antivirale de l'hôte en empêchant la production d'interféron de type I. L'analyse du mécanisme utilisé par NSs pour assurer cette fonction antagoniste de la production d'interféron indique que NSs est en réalité, un inhibiteur général de la transcription cellulaire qui interagit avec p44 une des sous unités du facteur général de transcription TFII H. En séquestrant p44 et XPB, une autre sous unité de TFII H dans le filament nucléaire, la concentration cellulaire en TFIIH s'appauvrit et la cellule n'a plus la capacité de transcrire ses ARN.

l'étude de la transcription et réplication à l'aide de minigénomes

Afin de développer un système de génétique inverse, nous avons établi un système de transcription où les protéines et les ARN viraux sont exprimés à partir de plasmides. Ce système a été testé à l'aide d'un mini-génome ou ARN pseudo-viral, porteur des séquences non codantes de l'un des trois segments génomiques L, M et S et du gène rapporteur de la chloramphénicol acétyle transférase en orientation antisens. Ces mini-génomes sont synthétisés à partir de plasmides sous le contrôle du promoteur de l'ARN polymérase I cellulaire. Nous avons construit les plasmides permettant la synthèse des mini-génomes L-CAT, M-CAT et S-CAT et avons montré que ces derniers sont effectivement transcrits par le complexe viral formé de la polymérase L et de la nucléocapside N.

Production d'antigène recombinant pour le diagnostic sérologique

Certains bunyavirus se repliquent mal dans les cultures cellulaires (hantavirus) ou pour d'autres virus, leur manipulation nécessite un laboratoire de haute sécurité (fièvre hémorragique de Congo-Crimée), ce qui rend difficile la préparation d'antigènes viraux utilisables pour le diagnostic sérologique. Lors d'infection par les Bunyavirus, la nucléoprotéine N est l'antigène principal et induit une forte réponse humorale. Nous avons mis au point un test de détection d'anticorps par ELISA en utilisant une forme recombinante de la nucléoprotéine de l'hantavirus Puumala. Cet antigène est exprimé par le réplicon du virus de la forêt de Semliki ; il permet de diagnostiquer cette fèvre hémorragique non mortelle qui circule dans le Nord et l'Est de la France et de détecter les infections virales chez le campagnol roussâtre qui sert de réservoir.

Légende

Fig 1. Le filament nucléaire formé de la protéine NSs dans une cellule infectée par le virus de la fièvre de la vallée du Rift

Mots-clés: fièvre hémorragique, arbovirus, zoonose, hantavirus, pathogenèse


Rapports d'activité 2004 - Institut Pasteur
filet

Debut de Page recherche Portail Institut Pasteur

En cas de problèmes, de remarques, ou de questions concernant cette page Web écrire à rescom@pasteur.fr