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     Analyse et microséquençage des protéines (Plate-forme)


  Responsable : d’Alayer Jacques (jdalayer@pasteur.fr)


  resume

 

La Plate-forme a deux activités : le microséquençage chimique des protéines et l'analyse des protéines au moyen de la technologie des " ProteinChip arrays " de Ciphergen. Technologie qui combine la capture des protéines sur différentes surfaces chimiques et l'analyse par spectrométrie de masse de type MALDI-TOF.

Ces activités ont été réalisées tant au bénéfice de l'Institut Pasteur qu'au bénéfice des laboratoires extérieurs.



  rapport

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Depuis juillet 2003, le laboratoire est situé au rez-de-chaussée du bàtiment Génopole.

Le microséquençage des protéines est resté une activité importante. La détermination des séquences est faite, soit à partir de protéines et peptides purifiés ou partiellement purifiés, soit à partir de fragments internes de ces molécules. Fragments internes obtenus par coupure enzymatique et purifiés par chromatograhie de type HPLC. Les séquences sont déterminées par séquençage automatique selon la méthode chimique décrite par Edman (deux séquenceurs d'Applied Biosystems sont disponibles : un ABI 473A et un ABI 494). Une activité de conseil pour la mise au point de microtechniques nécessaire à la préparation des échantillons peut être proposé.

350 échantillons ont été analysés pour 70 laboratoires dont 36 laboratoires extérieurs.

L'analyse des protéines par capture sur différentes surfaces chimiques et l'analyse par spectrométrie de masse (SELDI-TOF-MS) de Ciphergen (http://www.ciphergen.com) est une activité dont la demande continue à croître.

La diversité des analyses possibles, la sensibilité et la rapidité en font une technologie de choix. Par exemple : l'analyse d'interactions moléculaires spécifiques, l'analyse de l'expression différentielle de protéines (découverte et validation de biomarqueurs), l'aide à la purification, la caractérisation et l'identification de protéines, la recherche de sites de phosphorylation etc …

Au cours de l'année, 46 personnes ont utilisé cette nouvelle technologie.

Mots-clés: Protéine, microséquençage, ProteinChip, Ciphergen, spectrométrie de masse



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        d’Alayer Jacques (ingénieur, jdalayer@pasteur.fr)

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