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  Staphylo


  Responsable : EL SOLH, Névine (nelsolh@pasteur.fr)


  resume

 

Les staphylocoques sont les agents étiologiques d'infections bactériennes sévères dont la prévalence est particulièrement élevée en pathologie infectieuse. Les difficultés thérapeutiques résultent de la multirésistance aux antibiotiques des souches hospitalières. L'identification et le typage moléculaire, comme l'étude de la résistance aux antibiotiques, sont des thèmes de recherche liés à l'activité du Centre National de Référence rattaché à l'Unité. La mise en évidence de facteurs pariétaux responsables de l'adhésion aux protéines de la matrice extracellulaire vise à mieux comprendre la physio-pathologie des infections staphylococciques sur prothèse.



  rapport

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Etude des propriétés d'adhésion aux protéines matricielles du domaine central des autolysines staphylococciques de type Atl : J. Allignet, I. Old, N. El Solh, en collaboration avec P. England

Les deux domaines enzymatiques des autolysines de type Atl sont séparés par une région centrale constituée par trois séquences peptidiques imparfaitement répétées incluant chacune deux motifs GW (glycine-tryptophane). Les régions centrales des autolysines Atl (S. aureus), AtlE (S. epidermidis) et AtlC (S. caprae) ont été purifiées. Elles se lient à plusieurs protéines matricielles : fibronectine, fibrinogène, vitronectine et sialoprotéine osseuse. Le biosenseur optique BIAcore a été utilisé pour l'analyse de la cinétique d'interaction du domaine répété de AtlC avec la fibronectine immobilisée. L'aspect de la courbe évoque l'existence de plusieurs types d'interactions d'affinité variable (Kd = 10-9 M). La technique qui consiste à selectionner des phages présentant une forte affinité vis-à-vis du domaine central de AtlC (Phage Display) a été également utilisée. Les phages de la série M13 utilisés expriment la protéine de surface pIII en fusion avec une banque de peptides de sept acides aminés. Treize des 44 phages ayant une forte affinité présentaient la même séquence peptidique, partiellement retrouvée dans la vitronectine. Les 31 autres phages présentaient des similitudes partielles avec la fibronectine. Des peptides incluant les motifs similaires aux phages ont été choisies pour évaluer leur aptitude à inhiber la fixation à la fibronectine et à la vitronectine.

Caractérisation d'une protéine serine-aspartate (SD) staphylococcique, SdrY, incluant un domaine de liaison à la fibronectine : S. Aubert, J. Allignet, N. El Solh, en collaboration avec Cécilia Rydèn

Les protéines incluant un domaine riche en dipeptides SD sont des adhésines putatives. Nous avons isolé deux gènes codant des protéines SD, sdrY et sdrZ, d'une souche infectieuse de Staphylococcus caprae. Ces deux gènes séquencés ont été décelés dans toutes les souches de S. caprae analysées. Les tailles des régions codant les domaines riches en SD peuvent varier avec les souches, ce qui suggère qu'elles sont sujettes à des remaniements. Un domaine de liaison à la fibronectine a été caractérisé dans la protéine SdrY (1049 aa), dotée d'un motif LPDTG en position C-terminale. Aucune région se liant aux protéines matricielles testées (fibronectine, fibrinogène, vitronectine et sialoprotéine osseuse) n'a été décelée dans la protéine SdrZ (539 aa), similaire à SdrH de S. epidermidis et dotée d'une région C-terminale riche en acides aminés hydrophobes mais dépourvue du motif LPXTG. SdrY est la première adhésine se liant spécifiquement à la fibronectine décrite parmi les staphylocoques à coagulase-négative.

Analyse des sites d'insertion dans le génome des souches cliniques de S. aureus, du transposon Tn5406 de résistance à la streptogramine A : J. Haroche, J. Allignet, N. El Solh

Tn5406 véhicule un variant du gène vga(A) qui code une protéine ABC conférant la résistance à la streptogramine A. Les trois gènes impliqués dans sa transposition sont similaires à ceux de Tn554. Une à deux copies de Tn5406 ont été décelé(e)s dans le chromosome et/ou les plasmides des quatre souches cliniques de S. aureus étudiées. Les plasmides dans lesquels se sont insérés les copies de Tn5406 portent deux autres gènes de résistance à la streptogramine A, vga(B)-vat(B). Les copies chromosomiques sont insérées, soit dans le site préférentiel d'insertion de Tn554, soit dans un site localisé dans une cassette du type "mecIIIA". L'insertion dans ces deux sites est associée à l'interruption de gènes codant des protéines similaires à YsxA ou RadC, probablement impliquées dans la réparation de l'ADN. Des formes circulaires de Tn5406 ont été décelées dans deux des quatre souches, ce qui suggère que ce transposon peut être fonctionnel.

Analyse structurale et fonctionnelle de la protéine Vga : O. Chesneau, N. El Solh

Un programme transversal de recherche (PTR-55) a été initié (collaborations avec Elie Dassa, Unité de Programmation Moléculaire et Toxicologie Génétique; Jean-Luc Guesdon, Laboratoire d'Ingénierie des Anticorps; et Muriel Delepierre, Unité de Résonance Magnétique Nucléaire des Biomolécules) pour caractériser le mécanisme de fonctionnement d'une protéine ABC bi-domaine impliquée dans la résistance au composant A des streptogramines.

Activités du Centre National de Référence (CNR) des Staphylocoques (http://www.pasteur.fr/sante/cire/cadrecnr/staph-activites.html) : N. El Solh, O. Chesneau, A. Morvan, S. Aubert (remplacée par M. Davi depuis 08/01), J. Allignet

L'activité d'expertise du CNR porte principalement sur la taxonomie, le typage et la résistance aux antibiotiques. En 2000, 417 souches ont été analysées. Le facteur préoccupant se révèle être la dissémination de clones épidémiques de S. aureus résistant aux ß-lactamines et de sensibilité diminuée aux glycopeptides. Nous avons été sollicités par l'InVS et par le Comité "Antibiogramme" de la S.F.M. pour contribuer à l'évaluation de l'ampleur exacte du phénomène en développant des méthodes rapides de criblage.



  publications

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  personnel

  Secrétariat Chercheurs Stagiaires Autre personnel
 

TRAN, Catherine - I.P. cathtran@pasteur.fr

EL SOLH, Névine - Chef d'Unité - I.P. nelsolh@pasteur.fr

CHESNEAU, Olivier - Assistant de recherche - I.P. - chesneau@pasteur.fr

OLD, Iain - Assistant de recherche - I.P. - igold@pasteur.fr

HAROCHE, Julien (thèse en sciences)

HOSAN-AGHAIE, Negin (depuis le 3/12/01)

ALLIGNET, Jeanine - Ingénieur Position II - I.P. allignet@pasteur.fr

MORVAN, Anne - Technicienne Supérieure de Laboratoire - I.P. amorvan@pasteur.fr

Jusqu'en août 01:

AUBERT, Sylvie - Technicienne Supérieure de Laboratoire - I.P.

Depuis août 01 :

DAVI, Marilyne - Technicienne Supérieure de Laboratoire - I.P. mdavi@pasteur.fr


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