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  Responsable : Pellegrini Sandra (pellegri@pasteur .fr)


  resume

 

Les interférons de type I (IFN-a/b) interviennent comme acteurs principaux dans la réponse innée et modulent la réponse adaptative contre les pathogènes. Notre recherche est centrée sur l'étude des mécanismes moléculaires à la base des réponses cellulaires aux IFN-a/b. Nous nous intéressons à la biosynthèse, l'assemblage et la dynamique d'activation du récepteur des IFN-a/b qui est complexé aux tyrosine kinases Tyk2 et Jak1, membres de la famille JAK. Un projet vise à étudier l'interaction entre Tyk2 et la chaîne IFNAR1 du récepteur et élucider le rôle chaperon de la kinase. Un deuxième projet vise à la caractérisation fonctionnelle et biochimique de deux nouveaux partenaires de Tyk2 (Pot-1 et Pot-2) identifiés par l'approche du double hybride. Un troisième projet analyse le rôle de l'IFN-a/b dans le développement des lymphocytes T humaines.



  rapport

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Localisation nucléaire de Tyk2 - Ragimbeau, J., E. Dondi, A. Vasserot, P. Romero, G. Uzé and S. Pellegrini. 2001. Receptor interaction region of Tyk2 contains a motif required for its nuclear localization. J. Biol. Chem. 276 : 30812

Un effort a été porté sur l'étude de la localisation de Tyk2 sauvage et de diverses formes mutées, exprimées dans une lignée Tyk2-négative. La visualisation directe de la GFP fusionnée à Tyk2 et des expériences d'immunofluorescence ont permis de démontrer une distribution diffuse de Tyk2, y compris dans le noyau. La localisation nucléaire de Tyk2 nécessite d'un motif de type NLS, riche en arginines, qui est situé dans le domaine d'interaction avec les récepteurs de cytokines. Nos études montrent que Tyk2 réside dans le noyau indépendamment de sa liaison au récepteur. Cette fraction nucléaire ne semble pas intervenir dans les réponses transcriptionnelle et antivirale induites par l'IFN-a/b, et sa fonction reste inconnue.

Interférence entre récepteurs de cytokines partageant Tyk2 - Dondi, E., E. Pattyn, G. Lutfalla, X. Van Ostade, G. Uzé, S. Pellegrini, and J. Tavernier. 2001. Down-modulation of type I interferon responses by receptor cross-competition for a shared Jak kinase. J. Biol. Chem. 276 : 47004

Chez les mammifères, les quatre membres de la famille de protéine tyrosine kinases JAK sont partagés entre un grand nombre de récepteurs de cytokines, suggérant la possibilité d'interférence. En collaboration, nous avons établi un modèle d'étude du comportement de la kinase Tyk2 partagée entre différents récepteurs, qui nous a permis de démontrer une diminution de la réponse à l'IFN-a, suite à expression d'un récepteur exogène. Nos résultats montrent que des récepteurs associant Tyk2 peuvent séquestrer la kinase et de ce fait diminuer la réponse à IFN-a/b. Ceci représente un nouveau mécanisme de trans-modulation entre récepteurs de cytokines.

Tyk2 est un régulateur de l'expression de la chaîne IFNAR1 à la surface cellulaire (J. Ragimbeau)

Récemment, nous avons initié une étude qui vise à comprendre le mécanisme par lequel la tyrosine kinase Tyk2 est requise pour l'expression de la chaîne IFNAR1 du récepteur. Dans un système de sur-expression, nous démontrons que IFNAR1 seul se trouve confiné dans le compartiment golgien, tandis que la co-expression IFNAR1 plus Tyk2 entraîne la maturation du récepteur vers la surface membranaire. Ce résultat suggère que la formation de complexes récepteur/Jak a lieu précocemment dans la voie biosynthétique du récepteur.

Nouveaux partenaires de Tyk2 (C. Steindler)

La région amino-terminale des protéines JAK contient les déterminants moléculaires impliqués dans l'interaction avec les récepteurs de cytokines. L'analyse de cette région a révélé la présence d'un domaine apparenté au domaine FERM, qu'on retrouve dans de nombreuses protéines, comme la famille ERM (ezrine, radixine, moesine), où il participe à des interactions intramoléculaires et de ciblage à la membrane. Nous avons entrepris un criblage double hybride chez la levure en utilisant comme appât le domaine FERM de Tyk2. La caractérisation biochimique et fonctionnelle de deux partenaires de Tyk2 est en cours. La protéine Pot-1 est exprimée de façon ubiquitaire et se localise dans un compartiment vésiculaire, tandis que Pot-2 est neuronale-spécifique, est associée aux microtubules et appartient à une nouvelle famille, comprenant deux autres membres.

Étude de la réponse à IFN-a/b des lymphocytes T humains (E. Dondi)

Un aspect critique de la réponse immune aux pathogènes est médié par les lymphocytes T CD4+ et CD8+ qui sont activés et se différencient en sous-populations fonctionnellement distinctes. L'IFN-a/b produit précocemment en réponse à une infection virale ou bactérienne, exerce de multiples effets immunorégulateurs qui relient l'immunité innée et adaptative. Nous avons découvert que la réponse transcriptionnelle à l'IFN-a/b des lymphocytes CD4+ différenciés en Th1 et Th2, ainsi que des lymphocytes CD8+ activés, est fortement compromise par rapport à la réponse des précurseurs naïfs. Nos résultats suggèrent que cette modulation se met en place dès l'entrée en prolifération des cellules et fait partie du programme complexe de différenciation T. Le mécanisme moléculaire et la relevance physiologique de ce phénomène sont à l'étude.



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  personnel

  Secrétariat Chercheurs Stagiaires Autre personnel
 

Houssin Wendy, wendy.houssin@pasteur.fr

 

Dondi Elisabetta, Post-Doc, edondi@pasteur.fr

Steindler Corinna, Post-Doc, costei@pasteur.fr

Ragimbeau Josiane, Ingénieur, jragimbe@pasteur.fr


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