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  Mymol


  Responsable : DROMER Françoise (dromer@pasteur.fr)


  resume

 

Une meilleure connaissance de l'interaction entre l'hôte et les champignons pathogènes pourrait améliorer le pronostic des mycoses systémiques. Nous centrons nos recherches sur la pathogénicité de Cryptococcus neoformans et de Candida albicans par une approche de l'hôte (étude épidémiologique, modèles cellulaires et animaux) et du pathogène (facteurs de virulence, variabilité).



  rapport

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Cryptococcus neoformans

L'étude de la physiopathologie des cryptococcoses et des mécanismes de virulence de Cryptococcus neoformans représentent à terme les meilleurs moyens d'améliorer la prise en charge des patients atteints de cryptococcose, en nombre important puisque cette infection opportuniste touche au moins 25% des patients infectés par le virus de l'immunodéficience humaine en zone tropicale. C. neoformans est une levure basidiomycète capsulée qui provoque des méningo-encéphalites de pronostic sévère malgré les traitements antifongiques (³ 20% de mortalité), ce qui justifie la recherche de mesures thérapeutiques ou prophylactiques nouvelles.

Capsule de C. neoformans (G. Janbon, F. Provost)

Chaque cellule de C. neoformans est entourée d'une capsule polysaccharidique qui représente le facteur de virulence principal. Ainsi, les souches acapsulées sont avirulentes et la capsule a un effet délétère sur la réponse immunitaire. L'utilisation d'anticorps monoclonaux spécifiques nous a permis d'observer une grande variabilité de structure d'une cellule à l'autre au sein d'une même population cellulaire. Notre hypothèse de travail est que la variabilité de structure de la capsule est, au moins pour une part, responsable de la virulence de C. neoformans. Alors que les mécanismes et les déterminants génétiques de la variabilité antigénique sont connues pour de nombreux micro-organismes procaryotes et eucaryotes, aucune étude n'a été menée en ce sens chez les champignons pathogènes. Nous avons cloné des gènes codant pour divers éléments de la voie de biosynthèse du polysaccharide capsulaire et étudions les mécanismes qui sont responsables de la variabilité de sa structure.

Interactions entre barrière hémato-encéphalique (BHE) et C. neoformans (F. Dromer, O. Lortholary, I. Kansau, M. Lepors, L. Improvisi)

Notre objectif est de comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires à l'origine de la méningo-encéphalite cryptococcique. Deux types d'approches sont utilisées. Une approche anatomo-pathologique pour identifier les structures impliquées dans le passage de la BHE après la phase de fongémie (utilisation d'un modèle murin) et une approche cellulaire pour identifier les paramètres modifiant l'interaction entre cellules endothéliales (Human Umbilical Vein Endothelial Cells - HUVEC) ou monocytes (lignée U937) et levures . Les interactions sont mesurées en terme d'adhérence, de phagocytose et d'influence sur la signalisation intracellulaire des MAPK. L'influence de la présence (gène CAP64) et de la structure (gènes CAS) de la capsule polysaccharidique sur ces différents paramètres est étudiée grâce à des couples de souches isogéniques CAS/cas-D et CAP/cap-D.

Réponse humorale aux antigènes protéiques de C. neoformans (F. Dromer, G. Janbon, S. Jacquelin)

En analysant la réponse humorale chez les souris inoculées par C. neoformans, nous avons mis en évidence l'existence d'anticorps préférentiellement produits par les animaux qui survivaient à l'infection. Nous avons identifié l'une des protéines impliquée dans cette réponse humorale, et cloné le gène responsable. Notre objectif est de rechercher si la présence d'anticorps spécifiques est prédictive du pronostic de l'infection chez l'homme et d'étudier le potentiel vaccinal de cette protéine. Ce projet fait l'objet d'un PTR avec les groupes de Y. Germani (Institut Pasteur de Bangui) et de JL Guesdon (Ingéniérie des Anticorps).

Cryptococcoses humaines (F. Dromer, O. Lortholary, O. Launay, L. Improvisi, O. Ronin).

Une étude clinique multicentrique nationale (étude Crypto A/D) sur la physiopathologie des infections dues à C. neoformans a été mise en place en avril 1997. Cette étude permet de rassembler des données cliniques et épidémiologiques sur les patients infectés par C. neoformans. En parallèle, les souches ont été conservées pour typage et des liquides biologiques ont été prélevés à des temps importants du traitement. L'analyse des différents paramètres est en cours au terme des 4 ans d'inclusion (>200 patients inclus). L'étude de la réponse locale (méninges, poumons, urines) et systémique (plasma) se fait en analysant les profils de cytokines pro- et anti-inflammatoire en fonction de la dissémination de l'infection, du sérotype infectant et du statut immunitaire de l'hôte (responsable O. Lortholary). Nous avons déjà démontré que l'infection par le VIH était associée à une réponse inflammatoire diminuée dans le LCR des patients atteints de méningite cryptococcique par rapport à ce qui était observé sur d'autres terrains immunitaires. En juin 2001, une étude observationnelle des conditions d'arrêt de la prophylaxie secondaire de la cryptococcose chez les sujets infectés par le VIH et traités par une thérapeutique antirétrovirale hautement active a été mise en place (responsable O. Lortholary).

Candida albicans

Candida albicans, une levure ascomycète saprophyte du tube digestif, est le deuxième microorganisme étudié dans l'Unité de Mycologie Moléculaire. Cette levure est responsable d'infections sévères chez des patients immunodéprimés par des chimiothérapies aplasiantes, des transplantations d'organes ou de moelle osseuse, mais aussi d'infections nosocomiales dans des services de réanimations. Outre la participation au Réseau Infections Fongiques dans le cadre de la plate-forme technologique modèles animaux (F. Dromer, L. Improvisi), nous abordons deux aspects :

Etude de la biosynthèse des b1,2 oligo mannosides chez C. albicans (G. Janbon, C. Mille)

Le contact entre C. albicans et les cellules de l'hôte se fait au niveau de la paroi du champignon. Celle-ci est principalement composée de glucanes (polymères b-1,3 et b-1,6 de résidus glucose), de mannanes (polymères a-1,2 et a-1,3 de résidus mannose) et de mannoprotéines. En plus de ces polymères a de résidus mannose, des b-1,2 oligomannosides sont associés, soit aux mannoprotéines pariétales, soit au phospholipomannane (PLM). De nombreuses études ont montré que la présence de ces résidus était associée à la virulence de C. albicans. Alors que les voies de biosynthèse des b-glucanes et les mannoprotéines sont au moins partiellement connues, aucun gène participant à la synthèse des b-1,2 oligomannosides n'a été identifié que ce soit au niveau du PLM ou de la paroi. Le but de notre travail mené en étroite collaboration avec le laboratoire de D. Poulain à Lille, est d'identifier les gènes responsables de la synthèse des b-1,2 oligomannosides chez C. albicans en vue de déterminer l'influence de ces résidus sur la physiopathologie des infections à Candida.

Etude de la formation de biofilms chez C. albicans et C. glabrata (G. Janbon, F. Dromer, I. Iraqui)

Les biofilms sont des structures tri-dimensionnelles de micro-organismes qui se développent sur différents supports. En ce qui concerne les Candida, ces structures peuvent se développer sur les cathéters ou encore sur des prothèses et sont certainement des sources de ré-infection malgré les traitements antifongiques. L'objectif de ce projet est donc de déterminer les mécanismes moléculaires de la formation de biofilms à Candida. Ce projet fait l'objet d'un PTR avec les groupes de C. d'enfert (Unité Microbiologie et Environnement) et de JM Ghigo (Génétique des Biofilms).

 

 

Centre National de Référence des Mycoses Humaines et des Antifongiques. Son activité comprend plusieurs aspects : l'étude de l'épidémiologie des infections fongiques, et en particulier celles dues à C. neoformans, C. albicans et Histoplasma capsulatum à travers des réseaux de correspondants à l'échelle nationale et européenne ; l‘étude de la sensibilité des souches de champignons filamenteux et de levures aux antifongiques et la surveillance de l'évolution des profils de sensibilité en fonction des espèces au cours du temps ; l'identification des champignons pathogènes pour l'homme ; la réalisation des sérologies spécifiques dans le cadre du diagnostic ou de la surveillance des mycoses exotiques ; des activités de conseil (prise en charge diagnostique et thérapeutique, interprétation de résultats biologiques) ; enfin, l'évaluation de nouvelles molécules antifongiques in vitro et dans des modèles animaux et l'évaluation de tests diagnostiques.

Légendes des photos :

Photo 1 : visualisation de la capsule polysaccharidique de C. neoformans par coloration négative à l'encre de Chine.

Photo 2 : Internalisation d'une levure marquée à la fluorescéine (C. neoformans) in vitro par une cellule de la lignée monocytoïde U937 (microscopie confocale)



  publications

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  personnel

  Secrétariat Chercheurs Stagiaires Autre personnel
  MARTIN Edith , emartin@pasteur.fr

DROMER, Françoise, IP, chef de laboratoire, dromer@pasteur.fr

JANBON, Guilhem, IP, assistant, janbon@pasteur.fr

LORTHOLARY, Olivier, AP-HP, olortho@pasteur.fr

CHABASSE, Christine, stagiaire

GONTIER, Catherine, DESS

KANSAU, Imad, postdoctorant

LEPORS, Marina, DEA

MILLE, Céline, thèse

LAUNAY, Odile, Médecin d'études cliniques

IMPROVISI, Luce, ITA

JACQUELIN, Sébastien, technicien

PROVOST, Frédérique, ITA

RONIN, Olivier, ITA


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