Portail IP bandeau_genéral
  Bioregim


  Responsable : LECLERC Claude (cleclerc@pasteur.fr)


  resume

 

L'activité de l'Unité est centrée sur la compréhension des mécanismes qui contrôlent la présentation des antigènes aux lymphocytes T par les cellules dendritiques et sur la mise au point de nouvelles stratégies vaccinales. Nous avons développé plusieurs stratégies d'activation des réponses T cytotoxiques ainsi que des glycopeptides synthétiques portant des motifs saccharidiques afin d'induire des réponses anti-tumorales.



  rapport

cale

A. L'adénylate cyclase de Bordetella pertussis : un nouveau vecteur ciblant les cellules dendritiques (en collaboration avec D. Ladant, Unité de Biochimie Cellulaire, et P. Sebo, Prague)

1. Identification du récepteur de l'adénylate cyclase (M. El-Azami El-Idrissi)

L'adénylate cyclase (CyaA) est l'une des toxines essentielles de Bordetella pertussis et possède la capacité de pénétrer dans les cellules eucaryotes. Nous avons démontré précédemment que CyaA utilise l'intégrine CD11b/CD18 comme récepteur cellulaire mais son domaine d'interaction avec cette intégrine n'est pas encore défini. En utilisant des mutants et des fragments de CyaA, nous avons démontré que le fragment 373-1706 est capable d'inhiber la fixation de CyaA au CD11b. De plus, l'inhibition de la fixation d'un anticorps anti-CD11b au CD11b par le fragment 373-1706 montre que ce fragment contient le domaine d'interaction CyaA/CD11b. Ces observations ont été confirmées par les résultats d'un test de fixation direct, utilisant des anticorps monoclonaux anti-CyaA. L'ensemble de nos résultats permet de concevoir un vecteur vaccinal capable de cibler une grande variété d'antigènes vers les cellules CD11b+ présentatrices d'antigène.

2. Induction de réponses T cytotoxiques antivirale et antitumorale (C. Fayolle et G. Dadaglio)

La capacité du vecteur CyaA à induire des réponses CTL dirigées contre des épitopes humains a été étudiée. Plusieurs CyaA recombinantes portant des épitopes de mélanome HLA-A2 restreints ont été produites et testées sur des souris transgéniques exprimant la molécule HLA-A2 (collaboration avec F. Lemonnier, IP). De fortes réponses CTL spécifiques de ces épitopes ont été obtenues chez les souris immunisées. Ces réponses ont pu être détectées 5 mois après l'immunisation démontrant que la CyaA induit des réponses mémoires à long terme. L'injection simultanée de CyaA recombinantes portant différents épitopes de mélanome induit des réponses CTL spécifiquement dirigées contre ces épitopes, démontrant ainsi la capacité de CyaA à induire des réponses CTL multispécifiques in vivo contre différents antigènes exprimés par des cellules tumorales.

Nous avons analysé également la faisabilité d'un vaccin polyépitopique construit à partir de la toxine CyaA, en insérant une séquence polyépitopique modèle codant pour 3 épitopes T CD8+ dérivés du LCMV, de la boucle V3 du VIH et de l'ovalbumine insérée dans différents sites permissifs de l'extrémité N-terminale de CyaA. L'étude de la présentation de ces épitopes a permis d'établir que les épitopes insérés dans la toxine CyaA sont correctement apprêtés et présentés par les cellules présentatrices de l'antigène. En outre, nous avons démontré que de fortes réponses cytotoxiques sont induites chez les souris immunisées contre chacun des épitopes quelque soit leur position dans la toxine. La capacité de ces protéines recombinantes polyépitopiques à induire une protection contre l'infection par le virus LCMV a été également démontrée. En outre, la pré-immunisation des souris par la toxine sauvage ou une toxine recombinante portant un épitope CTL n'affecte pas la réponse cytotoxique contre un autre épitope CTL inséré dans la toxine. Cette étude expérimentale constitue donc une étape importante pour le développement de vaccins polyvalents visant à stimuler des réponses cytotoxiques multispécifiques.

Nous développons actuellement une nouvelle approche qui consiste à lier de façon covalente des peptides synthétiques à CyaA. Ainsi, nous avons montré que l'épitope T, CD8+ (257-264 de l'ovalbumine) couplé chimiquement à CyaA induit in vivo des réponses CTL spécifiques. L'analyse in vitro de la présentation de l'épitope OVA couplé chimiquement à la CyaA à un hybridome spécifique a permis de déterminer que cet épitope est délivré dans la voie de présentation des antigènes cytosoliques impliquant le protéasome et les molécules TAP. Cette approche offre l'avantage de ne nécessiter qu'un seul vecteur auquel nous pouvons coupler par une simple réaction chimique tout peptide synthétique représentant un intérêt immunologique particulier.

B. Etude des mécanismes de délivrance de pseudo-particules virales exogènes dans la voie des molécules du CMH I (G. Moron en collaboration avec I. Casal et P. Rueda, Madrid)

Des pseudo-particules virales produites par l'auto-assemblage de la protéine VP2 (PPV-VLPs) et portant des épitopes hétérologues sont capables d'induire de fortes réponses T CD4+ et CD8+ en l'absence d'adjuvant. Compte-tenu que les antigènes exogènes ne sont pas normalement délivrés dans la voie CMH I, ces PPV-VLPs représentent un système très intéressant pour l'activation des réponses T cytotoxiques. Nous avons montré que seules les cellules dendritiques (CD) sont capables de présenter des épitopes T CD8+, portés par des PPV-VLPs, à des hybridomes T spécifiques. D'autre part, les CD provenant de souris immunisées par les PPV-VLPs-OVA sont capables d'induire une réponse cytotoxique spécifique lorsqu'elles sont injectées chez les souris naïves. Les PPV-VLPs suivent une voie non conventionnelle d'apprêtage de type CMH I, impliquant la macropinocytose, des protéases lysozymales, mais aussi le protéasome et les molécules TAP. Par ailleurs, l' apprêtement des PPV-VLPs-OVA est dépendant de la région flanquant l'epitope inséré.

C. Analyse des réponses CTL et Th induites par différentes sous populations de cellules dendritiques (G. Dadaglio et G. Schlecht)

Il est maintenant parfaitement établi que les cellules dendritiques représentent les seules APC capables d'induire des réponses immunitaires cellulaires primaires. Deux sous-populations de CD ont été identifiées et caractérisées sur la base de l'expression différentielle de la molécule CD8a. D'importantes différences fonctionnelles et de localisation ont été décrites entre ces deux sous-populations. Nous avons analysé les réponses CTL induites par les sous-populations CD8+ ou CD8- injectées par voie intraveineuse. Nous avons montré que chacune des sous-populations est capable d'induire une activité CTL bien que la sous-population CD8+ semble être moins efficace. De plus, l'induction de cette activité CTL est indépendante de la réponse T CD4+. Nous n'avons pas observé de réelle polarisation de la réponse Th suivant les CD utilisées pour l'immunisation, puisqu'une production de cytokine de type 1 et 2 a été observée dans tous les cas, malgré un plus haut taux de cytokine de type 2 induit par les CD CD8-. Nous avons aussi montré que la voie d'injection influence la polarisation des réponses T induites puisque les CD CD8+ ne sont pas capables d'induire une réponse de type Th2 lorsqu'elles sont injectées par voie sous-cutanée. L'ensemble de ces résultats indique que les deux sous-populations de CD peuvent être utilisées indifféremment dans des protocoles d'immunothérapie.

D. Etude de la réponse cellulaire T CD4+ dirigée contre un antigène délivré par le BCG (R. Lo-Man et X. Jiao en collaboration avec l'Unité de Génétique Mycobactérienne, IP).

Au cours d'une infection bactérienne, les cellules phagocytaires jouent un rôle central puisqu'elles sont directement impliquées dans l'élimination de l'agent bactérien et donc dans le contrôle de l'infection. Dans ce processus, le déclenchement de la réponse lymphocytaire T est primordiale puisqu'elle contribue par la production de cytokines, à augmenter l'activité bactéricide des cellules phagocytaires et permet d'établir une mémoire immunologique. Nous avons donc entrepris l'évaluation, lors des étapes précoces de l'infection par M. bovis BCG, de la contribution de deux populations, les macrophages et les cellules dendritiques, dans le développement d'une réponse immunitaire T CD4+. L'ensemble des résultats obtenus met en évidence le rôle prépondérant joué par les cellules dendritiques. Il est à noter que dans les 24 heures suivant l'infection, la production d'IL-12 n'est pas associée aux macrophages, mais uniquement aux cellules dendritiques, qu'elles soient CD8+ ou CD8-. Ce dernier point met en évidence la contribution importante des cellules dendritiques dans le développement de l'immunité anti-mycobactérienne, qu'elle soit innée ou acquise.

E. Rôle de lymphocytes T CD8+ dans l'immunité anti-mycobactérienne (L. Majlessi et M. Rojas)

La mise en évidence d'un rôle majeur du compartiment lymphocytaire T CD8+ dans l'immunité acquise anti-mycobactérienne nous a conduits: (i) à étudier les mécanismes de présentation des antigènes mycobactériens par la voie d'apprêtage et de présentation par les molécules de classe I du complexe majeur d'histocompatibilité et (ii) à évaluer l'efficacité de nouveaux vecteurs vaccinaux - élaborés dans notre laboratoire - capables d'induire de fortes activités T CD8+ ainsi que des réponses T CD4+ de type Th1 dans le contrôle de l'infection par Mycobacterium tuberculosis.

F. Elaboration d'un composé synthétique portant un motif saccharidique d'origine tumorale à des fins thérapeutiques et vaccinales (R. Lo-Man et Edith Dériaud en collaboration avec S. Bay et S. Vichier-Guerre, Chimie Organique, IP)

Parmi les marqueurs saccharidiques associés aux cellules tumorales, on retrouve le motif Tn (alpha-N-acetyl-galactosamine) associé aux protéines de type mucine. Nous avons développé un immunogène synthétique utilisant la structure d'un MAP (multiple antigenic peptide) contenant ce motif Tn sous forme de trimère dans le but d'induire des réponses immunitaires anti-tumorales à des fins thérapeutiques et vaccinales. Ce MAG s'est révélé très immunogène et une vaccination prophylactique réalisée avec ce composé permet de protéger les souris contre la greffe d'un adénocarcinome mammaire exprimant l'antigène Tn. De plus, lorsqu'un traitement thérapeutique est réalisé avec ce composé sur des souris porteuses d'une tumeur préétablie, il permet d'accroître très fortement la survie de ces souris. Sur la base de ces résultats, nous développons actuellement des composés utilisables chez l'homme.



  publications

puce Toutes les publications sur notre base de données


  personnel

  Secrétariat Chercheurs Stagiaires Autre personnel
 

PIRES Servanne (spires@pasteur.fr)

DADAGLIO Gilles, IP (Chargé de Recherche, gdadag@pasteur.fr)

LECLERC Claude, IP (Chef d'Unité, cleclerc@pasteur.fr)

LO-MAN Richard, IP (Assistant de Recherche, rloman@pasteur.fr)

MAJLESSI Laleh, IP (Chargée de Recherche, lmajless@pasteur.fr)

BOISGERAULT Florence, Chercheur post-doctoral

EL-AZAMI EL-IDRISSI Mohammed, Chercheur post-doctoral

MORON Gabriel, Chercheur post-doctoral

MOTIEIAN NAJAR Hossain, Chercheur post-doctoral

SCHLECHT Géraldine, Etudiante en Thèse

SUN Cheng-Ming, Etudiant en Thèse

DERIAUD Edith (Assistante Ingénieur, ederiaud@pasteur.fr)

FAYOLLE Catherine (Ingénieur, cfayolle@pasteur.fr)

ROJAS Marie (Technicienne, mrojas@pasteur.fr)


filet

Debut de Page recherche Portail Institut Pasteur

En cas de problèmes, de remarques, ou de questions concernant cette page Web écrire à rescom@pasteur.fr.