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  Responsable : Pierre TIOLLAIS (tiollais@pasteur.fr)


  resume

 

Les recherches de notre Unité portent sur l'oncogénèse, la virologie moléculaire et le vaccin recombinant contre l'hépatite B. Nous cherchons à identifier des gènes suppresseurs de tumeur impliqués dans le cancer du foie, et à déterminer le rôle de la protéine virale HBX et de l'activation oncogénique de la ß-caténine dans l'oncogénèse hépatique. Notre laboratoire étudie également les relations existant entre la compartimentalisation fonctionnelle du noyau et les leucémies aiguës à promyélocytes. Nous étudions d'autre part la relation entre les virus des hépatites B et C et leur hôte dans le but d'élaborer des anti-viraux. Enfin, nous avons mis au point un protocole de vaccination génétique thérapeutique contre l'hépatite B.



  rapport

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Virus de l'hépatite B et HépatocarcinomeResponsable: Marie Annick BUENDIA

Les mécanismes conduisant au développement d'un cancer du foie chez les patients infectés par le virus de l'hépatite B restent mal connus. La protéine régulatrice virale HBX a été impliquée comme co-facteur dans le processus tumoral, par sa capacité à réguler l'expression de nombreux gènes cellulaires. Nous étudions les interactions d'HBX avec les co-activateurs CBP, p300 et pCAF dans l'activation de promoteurs cellulaires et viraux, et l'activité de protéines HBX sauvages et mutées dans la dérégulation du cycle cellulaire et l'induction d'apoptose. Nous avons récemment initié une recherche à large échelle des gènes cellulaires cibles de la transactivation par HBX. Afin de nous rapprocher de la situation in vivo chez les patients infectés, ces études sont réalisées essentiellement dans des hépatocytes humains primaires ou dans le foie de souris.

Mécanismes Moléculaires de l'Oncogenèse HépatiqueResponsable: Marie Annick BUENDIA

Nous étudions les étapes moléculaires de la carcinogenèse hépatique chez l'homme et dans des modèles transgéniques murins. Nous avons montré que l'activation de la voie de signalisation Wnt par des mutations activatrices de la ß-catenine, dans l'hépatocarcinome et l'hépatoblastome, est associée à une prolifération cellulaire accrue. L'impact de la ß-catenine sur le profil d'expression génique et la progression du cycle est analysé dans des hépatocytes et des fibroblastes primaires humains. Par ailleurs, nous recherchons les propriétés fonctionnelles de l'interaction de la ß-caténine avec un partenaire cellulaire récemment identifié. Nos études chez la souris suggèrent qu'il existe des connexions entre les voies activées par la ß-catenine et le gène suppresseur de tumeur p53.


Expression membranaire et nucléaire de la ß-caténine (photo)

L'allélotypage des tumeurs à l'aide de marqueurs microsatellites permet de définir des régions chromosomiques fréquemment altérées pouvant contenir des gènes suppresseurs de tumeur. Nous avons cartographié les pertes d'allèle les plus fréquentes dans des échantillons d'hépatocarcinomes humains et murins. Chez l'homme, nous avons évalué l'implication de la E-cadherine dans l'hépatocarcinogenèse par une étude fine du chromosome16 combinée à une étude génétique et biochimique de la protéine. Chez la souris, l'allélotypage des hépatocarcinomes induits par c-Myc suggère que l'altération de la voie INK4/RB est une étape importante de l'oncogenèse hépatique.

Génétique du cancer du foieResponsable : Anne DEJEAN

L'inactivation somatique de gènes suppresseurs de tumeur est d'importance majeure dans le développement des cancers humains. Dans le but d'identifier des suppresseurs de tumeur potentiellement inactivés au cours du développement du cancer du foie, une cartographie des pertes d'allèles les plus fréquentes (LOH) dans le cancer du foie a été réalisée sur l'ensemble des chromosomes humains. Cet allélotypage nous a permis de mettre en évidence des pertes de matériel génétique fréquentes en 1p, 4q, 6q, 8p, 13q et 16p. Une région de 2cM en 8p23 fait déjà l'objet d'une étude approfondie. Un deuxième allélotypage restreint à l'analyse du chromosome 8 a révélé l'existence de deux autres régions fréquemment délétées en 8p21/23 suggérant la présence de deux nouveaux suppresseurs de tumeur dans ces régions. Parallèlement, nous recherchons des délétions doubles et/ou hétérozygotes dans une centaine de lignées cellulaires tumorales (dont 60 d'origine hépato-biliaire). Des gènes candidats seront potentiellement identifiés dans les régions minimales de perte et des mutations ponctuelles somatiques seront recherchées dans ces gènes. Ces recherches, focalisées dans un premier temps sur le chromosome 8, seront par la suite étendues à d'autres régions chromosomiques, notamment la région 4q. Parallèlement à l'étude de délétions alléliques, nous avons recherché par CGH (Comparative Genomic Hybridization) des amplifications géniques dans l'hépatocarcinome dans le but d'identifier des régions susceptibles d'abriter des oncogènes. Dans 65% des tumeurs, nous avons pu observer une amplification en 1q et 8q. Nous allons porter nos efforts sur l'étude de ces deux régions en priorité. La stratégie employée fera appel à la technique nouvellement décrite de CGH array. Une étude de transcriptome sur le cancer du foie a d'autre part été initiée en collaboration avec l'équipe de MA Buendia dans le cadre du projet national CIT2 de la Ligue Contre le Cancer.


Compartimentalistion fontionnelle du noyau et leucémie aiguë promyélocytaireResponsable : Anne DEJEAN

Parallèlement aux travaux portant sur le cancer du foie, notre équipe étudie depuis plusieurs années le rôle des récepteurs aux rétinoïdes dans l'oncogénèse chez l'homme. Nous avons pu montrer que la translocation t(15,17) associée aux leucémies aiguës promyélocytaires (LAP) génère une protéine hybride entre la protéine PML et le récepteur a
de l'acide rétinoïque (PML-RARa
). La protéine PML est localisée au niveau de structures subnucléaires appelées corps nucléaires qui sont désorganisées de manière réversible par l'acide rétinoïque dans les cellules LAP. Cette observation, qui permet d'impliquer une structure nucléaire dans une pathologie humaine, corrèle de façon frappante avec l'effet thérapeutique des rétinoïdes dans ce type d'hémopathie. Nous avons montré récemment que les protéines PML et SP100, les deux composants majeurs des corps nucléaires, sont modifiées de façon covalente par une petite protéine apparentée à l'ubiquitine appelée SUMO-1. Cette modification, contrairement à l'ubiquitination, n'est pas associée à une dégradation protéique mais semble jouer un rôle majeur dans la compartimentalisation subcellulaire des protéines. Ainsi la ‘sumoylation' de PML est-elle déterminante pour son adressage vers les corps nucléaires ainsi que pour le maintien de l'intégrité structurale de ces ‘organelles'. Compte-tenu du lien étroit existant entre la sumoylation et la dynamique des corps nucléaires, nous consacrerons un effort important à l'étude de cette nouvelle voie de modification post-traductionnelle afin de clarifier son rôle dans l'organisation générale du noyau de la cellule normale et de la cellule leucémique. Parallèlement, nous tenterons d'élucider la fonction des structures nucléaires PML et notamment leurs relations avec le compartiment chromatinien.Les Corps Nucléaires PML (photo)


Antigène HBs et vaccination Responsable : Marie-Louise Michel

Notre recherche est orientée vers l'immunothérapie des infections chroniques dues au virus de l'hépatite B. Nous étudions l'immunogénicité de différentes préparations vaccinales pour l'induction ou l'activation de réponses immunitaires T et B qui sont déficientes chez les porteurs chroniques du virus. En utilisant, comme modèle animal des souris transgéniques pour l'antigène de surface du virus (AgHBs), différentes approches ont été étudiées pour rompre la tolérance à cet antigène. Ces travaux ont conduit à une étude pilote puis à une étude clinique randomisée de vaccination thérapeutique. Nous avons montré qu'il était possible d'induire par la vaccination, chez ces patients, une réponse immunitaire spécifique de type CD4+ corrélée chez certains d'entre eux à l'élimination du virus. D'autre part, nous travaillons à un nouveau mode d'immunisation basé sur l'injection intramusculaire d'ADN codant pour les protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite B. L'immunisation génétique de souris transgéniques pour la molécule HLA-A2 a montré que les épitopes présentés après découpage in vivo étaient très comparables à ceux reconnus chez l'homme au cours de l'infection naturelle. Dans le modèle des souris transgéniques pour l'AgHBs, l'injection d'AgHBs couplé à des oligonucléotides contenant des motifs CpG stimule des lymphocytes T spécifiques de l'antigène viral, produisant des cytokines de type Th1 mais n'exerçant pas d'activité lytique in vitro ou in vivo. Ces lymphocytes sont capables de réguler l'expression des gènes viraux au niveau du foie des souris transgéniques par un mécanisme n'impliquant pas la lyse des hépatocytes. L'ensemble de ces travaux nous ont conduit à réaliser, en collaboration avec les cliniciens de l'hôpital Necker (Pr. Bréchot et Pr. Pol), un essai clinique de phase I de " vaccinothérapie spécifique par ADN nu ", dans lequel nous étudierons la réponse immunitaire induite. Enfin, les différents travaux réalisés sur l'AgHBs et sur la modulation de la réponse immune par la vaccination nous ont conduit à proposer cet antigène comme vecteur pour la présentation d'épitopes dérivés d'autres pathogènes et la stimulation spécifique du système immunitaire dans le modèle de l'infection par VIH et SIV.


Relation entre les virus d'hepatitis B (HBV) et C (HCV) et leur hôteResponsable : Catherine Transy

Nos études visent à caractériser les interactions moléculaires mises en jeu par HBV et HCV, au cours de leur cycle viral, dans le but de définir de nouvelles cibles thérapeutiques.
La protéine régulatrice X du virus HBV est indispensable à l'établissement de l'infection bien que son rôle précis n'ait pas été identifié. Nous avons montré que l'interaction entre X et la protéine cellulaire UV-DDB est déterminante, non seulement pour les activités de la protéine virale mesurables in vitro, mais aussi pour l'établissement d'une infection virale productive. Nous avons obtenu un dérivé peptidique comportant le domaine minimal d'interaction de la protéine X avec UV-DDB. Nous étudierons la capacité de ce composé à inhiber les activités de la protéine X, puis ses éventuelles propriétés anti-virales.
En raison de l'absence de système cellulaire permettant de propager le virus HCV, on connait mal la nature et la fonction des interactions entre les protéines virales matures, qui dérivent de la protéolyse d'un précurseur unique. Il en est de même pour les interactions entre le protéome viral et celui de l'organisme hôte. Nous avons développé des outils d'expression en cellules humaines d'une collection de domaines aléatoires couvrant toute la polyprotéine virale. Ces outils seront exploités pour compléter l'analyse précédemment réalisée par la méthode double-hybride des interactions entre protéines virales, identifier des interactions engagées entre les protéines virales et celles de l'hôte, identifier des épitopes viraux B et T.



  publications

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  personnel

  Secrétariat Chercheurs Stagiaires Autre personnel
 

DA Louise-Marie IP lmda@pasteur.fr

BUENDIA Marie-Annick DR1 CNRS mbuendia@pasteur.fr

DEJEAN Anne DR1 INSERM adejean@pasteur.fr

MICHEL Marie-Louise IR1 INSERM maloum@pasteur.fr

NEUVEUT Christine CR2 INSERM cneuveut@pasteur.fr

PINEAU Pascal CR IP ppineau@pasteur.fr

TRANSY Catherine DR2 INSERM ctransy@pasteur.fr

WEI Yu CR IP ywei@pasteur.fr

BISCHOF Oliver Post-doc

KIRSH Olivier Thèse

LEVY Laurence Thèse

LOIRAT Delphine Thèse

NACERDDINE Karim DEA

PUAUX Anne-Laure Thèse

SEELER Jacob Post-doc

WU Yuanfei Thèse

ZHANG Menghua Post-doc

BERGAMETTI Françoise Paris 7

BRES Evelyne IP

MARCHIO Agnès IP

RENARD Claire-Angélique IP

GEORGES Monique IP

LEGOUT Claudine IP

LEGUEULT Catherine IP

QUEROL Chantal IP


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