Institut Pasteur Rapport d'activité de l'unité Biologie du Développement pour l'année 1999

CNRS URA 1960


Responsable : BABINET Charles (chbabi@pasteur.fr)

Résumé du rapport

Notre laboratoire s'intéresse au développement embryonnaire de la souris. Trois voies de recherche sont poursuivies : 1) Le rôle des interactions nucléocytoplasmiques dans le développement préimplantatoire. 2) L'analyse de la fonction de certains gènes par mutagenèse dirigée in vivo (par recombinaison homologue dans les cellules souches embryonnaires (cellules ES)) et la recherche de gènes de développement grâce à la stratégie de piégeage de gènes dans les cellules ES. 3) La mise au point de stratégies plus efficaces de mutagenèse par recombinaison homologue (RH).

Abstract

Our laboratory is studying the mouse embryonic development. Three lines of research are conducted : 1) We are pursuing the positional cloning of a lethal mutation , Ovum mutant (Om), which induces death around the blastocyst stage and the expression of which depends on a parental effect. 3) We study the function of different genes in development via gene targeting approaches and we use a strategy of gene trapping to identify developmentally important genes. 3) We develop strategies to improve the efficiency of gene targeting.

Texte du rapport

Clonage de la mutation Ovum mutant, entraînant la mort embryonnaire au stade blastocyste et dont l'expression dépend d'un effet parental (P. Baldacci, M. Cohen-Tannoudji)

La lignée DDK est porteuse d'une mutation létale conditionnelle, Ovum mutant, qui entraîne la mort des embryons au stade blastocyste et dépend d'un effet parental. Nous avons maintenant établi un contig complet de la région génétique contenant le locus Om à l'aide de chromosomes artificiels de levure et de bactéries. Les techniques de piégeage d'exons et d'hybridation/sélection de cDNA nous ont permis d'identifier différentes séquences géniques. Plusieurs gènes candidats ont ainsi été identifiés ; des techniques d’analyse fonctionnelle sont mises en œuvre pour évaluer leur implication dans la létalité embryonnaire.

Analyse de la fonction des gènes par mutagenèse dirigée in vivo et recherche de gènes impliqués dans le développement par piégeage de gènes

Une approche en vue d’améliorer l’efficacité du ciblage génique (M. Cohen-Tannoudji)

Nous avons démontré que la recombinaison homologue dans les cellules ES était considérablement augmentée si l’on introduisait une cassure double brin dans le locus ciblé. Cette approche nous permet en particulier de créer, avec une grande efficacité, des allèles variés à un locus donné, porteur d’un site de reconnaissance d’une méganucléase, en cotransfectant dans les cellules un vecteur d’expression de la méganucléase et un vecteur de réparation contenant les séquences destinées à remplacer celles de l’allèle endogène. Nous développons différents outils afin 1) de rechercher des sites d’insertion neutre (non soumis à un effet de position) 2) d’éprouver la possibilité de promouvoir la recombinaison homologue directement in ovo.

Activité de service
(V. Guyot)

L'unité a la responsabilité d'un service pour la création de souris transgéniques.

Mots clés : Souris. Cellules ES. Développement embryonnaire. Mutagenèse ciblée. Interactions nucléocytoplasmiques.

Personnel de l'unité

Chercheurs de l'unité

BABINET Charles, CNRS et IP, chbabi@pasteur.fr BALDACCI Patricia, IP, baldacci@pasteur.fr BARRA Jacqueline, IP, barraja@pasteur.fr COHEN-TANNOUDJI Michel, CNRS, m-cohen@pasteur.fr COLUCCI-GUYON Emma, IP, emmaco@pasteur.fr

Stagiaires de l'unité

COUMAILLEAU Franck, Doctorant, coumaill@pasteur.fr LE BRAS Stéphanie, Doctorant, slebras@pasteur.fr

Autre personnel de l'unité

GUYOT Valérie, IP, vguyot@pasteur.fr
KRESS Chantal, CNRS, kerssova@pasteur.fr MESBAH Karim, IP, mesbahk@pasteur.fr
VANDORMAEL-POURNIN Sandrine, IP, drinette@pasteur.fr

Publications de l'unité

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