Rapport d'activité de l'unité Laboratoire de Développement Cellulaire

CNRS URA 1947

Responsable : MONTARRAS Didier & PINSET Christian (dmontarr@pasteur.fr - cpinset@pasteur.fr)

Résumé du rapport

Nos objectifs sont de comprendre les mécanismes qui contrôlent la croissance et la différenciation des cellules précurseurs des muscles du squelette. Au cours de cette année, nous avons poursuivi nos travaux selon trois axes distincts, mais complémentaires. Il s'agit : 1°) de l'étude de la dégradation cyclique du facteur de régulation myogénique, Myf5. 2)) de l'étude du phénotype (croissance, différenciation) de myoblastes dérivés de souris dépourvues respectivement des facteurs de régulation myogéniques Myf5, MyoD et Myogénine. 3°) de la mise au point de milieux de culture totalement définis (dépourvus de sérum) qui permettent la prolifération et la différenciation non seulement de cellules musculaires mais aussi d'autres types cellulaires.

Abstract

Our goal is to elucidate the mechanisms which control the growth and differentiation of the precursors of skeletal muscles.

In the course of this year, we have developed our work around 3 distinct but complementary axis : They concern : 1°) the study of the cyclic degradation of the muscle regulatory factor Myf5. 2°) the study of the phenotype (growth, differentiation) of myoblasts derived from mice missing respectively the muscle regulatory factors Myf5, MyoD and Myogenin. 3°) the definition of serum free media supporting growth and differentiation of muscle cells and other cell types.

Texte du rapport

1.Dégradation cyclique du facteur de régulation myogénique Myf5

(Catherine LINDON, Christian PINSET, Didier MONTARRAS)

Nous avons observé que le facteur Myf5 est dégradé au cours de la mitose par un mécanisme dépendant du protéasome. Ce mode de régulation rappelle celui des cyclines mitotiques. Nous étudions maintenant les conséquences de l’expression de versions mutées de la protéine Myf5 résistantes à la dégradation.

2. Myf5 et MyoD affectent la croissance des cellules musculaires déterminées

(Didier MONTARRAS, Peggy DOMEYNE, Catherine LINDON , Christian PINSET)

Nous avons observé que les myoblastes isolés d’animaux déficients en Myf5 ou MyoD présentent un déficit de croissance en culture. Nous formulons l’hypothèse que la coexpression des facteurs Myf5 et MyoD est un événement favorisant la prolifération des myoblastes. Dans le cas des cellules déficientes en myogénine c’est la régulation de Myf5 et certains aspects de la différenciation qui sont affectés.

3. Définition de milieux sans sérum pour la prolifération et la différenciation

(Christian PINSET, Didier MONTARRAS)

Comprendre la croissance et la différenciation cellulaire nécessite une exacte définition des milieux de culture. Nous avons déjà progressé dans ce sens et établi des recettes qui ont fait l’objet de déclaration d’invention et qui permettent la croissance prolongée et la différenciation de lignées de cellules musculaires.

COLLABORATIONS

Le Laboratoire est aussi engagé dans plusieurs collaborations. Nous en mentionnons deux qui se poursuivent.

1 - Régulation de l’expression et rôles des protéines de liaison des IGFs dans la différenciation des cellules musculaires, avec Sophie Rousse et Catherine Dubois (Unité INSERM 124, Hôpital Saint-Antoine, Paris)

2 - Régulation de l’expression et rôle du facteur de répression de la transcription, Laz3, dans la prolifération et la différenciation des cellules musculaires, avec Olivier Albagli-Curiel.

Personnel de l'unité

Secrétariat de l'unité

ANTOLINI Geneviève, IP

Chercheurs de l'unité

MONTARRAS Didier, IP
PINSET Christian, CNRS

Stagiaires de l'unité

ALBAGLI-CURIEL Olivier, Post-doc CNRS
DOMEYNE Peggy, Thèse
LINDON Catherine, Post-doc

Autre personnel de l'unité

CRETENET Claudine, IP

Publications de l'unité

1.Albagli, O., Lantoine, D., Quief, S., Quignon, F., Englert, C., Kerckaert,

       J-P., Montarras,D. Pinset, C. & Lindon, C. (1999). Overexpressed BCL6
       (Laz3) oncoprotein triggers apoptosis, delays S phase progression and
       associates with replication foci. Oncogene, sous presse.
    2.Herasse, M., Ono, Y., Fougerousse, F., Kimura, E-I., Stockholm, D.,
       Beley, C., Montarras, D., Pinset, C., Sorimachi, H., Suzuki, K.,
       Beckmann, J. & Richard, I. (1999). Expression and functional
       characteristics of Calpain 3 isoforms generated through tissue-specific
       transcriptional and posttranscriptional events. Mol. Cell. Biol., 19,
       4047-4055.
    3.Khandjian, E.W., Bardoni, B., Corbin, E., Sittler, A., Giroux, S., Heitz,
       D., Tremblay, S., Pinset, C., Montarras, D., Rousseau, F. & Mandel, J.
       (1998) Novel isoforms of the fragile X related protein FXR1P are
       expressed during myogenesis. Hum. Mol. Genet., 7, 2121-2128 (Medline
       99036683)
    4.Albagli-Curiel, O., Dhordain, P., Lantoine, D., Auradé, F., Quief, S.,
       Kerckaert, J.P., Montarras, D., & Pinset, C. (1998). Increased expression
       of the Laz3 (BCL6) proto-oncogene accompanies murine skeletal
       myogenesis. Differentiation, 64, 33-44 (Medline 99120219)
    5.Froeschlé, A., Alric, S., Kitzmann, M. Carnac, G., Auradé, F.,
       Rochette-Egly, C. & Bonnieu, A. (1998). Retinoic acid receptors and
       muscle b-HLH proteins : partners in retinoid-induced myogenesis.
       Oncogene, 16, 3369-3378 (Medline 98355272)
    6.Pinset,C. & Montarras, D. (1998). Cell systems for ex vivo studies of
       myogenesis : a protocol for the isolation of stable muscle cell populations
       from newborn to adult mice. In Cell Biology : A Laboratory Handbook,
       Second Edition, edit. J.E. Celis, Academic press, Vol. 1, pp 226-232.
    7.Poirier, C., Poussard, S., Faust, D.M., Imaizumi-Scherrer, T., Weiss,
       M.C., Ducastaing, A., Montarras, D., Pinset, C. & Guenet, J-L. (1998)
       Mapping, cloning, cDNA sequence, and expression of the gene encoding
       the mouse micromolar calpain large subunit. Mamm. Genome, 9, 388-389
       (Medline 98213648)
    8.Rousse, S., Montarras, D., Pinset, C. & Dubois, C. (1998). Up-regulation
       of insulin-like growth factor binding protein-5 is independent of muscle cell
       differentiation, sensitive to rapamycin, but insensitive to wortmannin and
       LY294002. Endocrinol., 139, 1487-1493 (Medline 98187774)
    9.Lindon, C., Montarras, D. & Pinset, C. (1998). Cell cycle-regulated
       expression of the muscle determination factor Myf5 in proliferating
       myoblasts. J. Cell. Biol., 140, 111-118 (Medline 98087596).