Procédure de demande de cristallisation


Comment faire ?

 Après avoir pris rendez-vous, les protéines sont amenées à la Plateforme avec un formulaire de prestation (il pourra être aussi envoyé par courriel selon les préférences de l’utilisateur : pf6@pasteur.fr).

Le criblage est fait soit sur le robot Cartesian (technique dite « sitting drop »), soit sur le robot Mosquito (techniques « sitting drop » ou « hanging drop »)

Le robot Cartesian ne propose que la méthode « sitting drop » avec des volumes fixes de gouttes de 200 nl.
Le robot Mosquito propose quant à lui des volumes variables de gouttes qu’il vous faut noter dans le formulaire.

Merci, en nous amenant un ou plusieurs échantillons, de remplir le formulaire que vous pouvez télécharger en cliquant ici.
Ce formulaire demande quelques précisions sur la protéine, les tampons utilisés et sert également à indiquer le robot que vous souhaitez utiliser, les volumes voulus si vous utilisez le mosquito et quel(s) kit(s) sont souhaités pour chaque criblage.

Le criblage de base se compose des Kits Hampton 1 et 2, Wizard 1 et 2, MDL 1 et 2, JBS 1-4, JBS 5-8 et PEGion/Cryo.
Le catalogue de l’ensemble de nos kits et de leur composition est consultable à la plateforme et à la fin de cette page.
Les plaques sont scellées et conservées à 18°C jusqu’à obtention de cristaux.


Une fois les cristaux obtenus et après vérification qu’il s’agit bien de cristaux de protéines (voir diffraction des Rayons X), les conditions de cristallisation peuvent être  affinées avec l’aide possible du robot Matrixmaker (voir le service Matrixmaker).



Procédure de demande de cristallisation
   

1- Télécharger le formulaire de demande de prestation ( fichier  PDF à compléter)

2- Apporter le formulaire à la PF6 .

3- Prendre rendez-vous avec le responsable afin de préciser les détails techniques en particulier le tampon de conditionnement et la concentration de la protéine à cristalliser.

4- Fournir selon le calendrier convenu le matériel nécessaire à la réalisation du projet.

Les coûts de consommables sont à la charge des laboratoires demandeurs (Voir la partie Tarifs).

 
Kits disponibles à la Plateforme :

Voir le plan des plaques de la Plate-Forme

Le criblage initial comprend 6 plaques de 96 conditions différentes soit 576 solutions différentes:

Kit Crystal screen et Crystal screen 2 –  – HR2-110 et HR2-112
 
Kit Wizard 1 et 2 - Jena Biosciences - EBS-WIZF

Kit JBS1-4 :
Jena Biosciences
JBS Screen 1 bulk -  CS-101L
JBS Screen 2 bulk -  CS-102L
JBS Screen 3 bulk -  CS-103L
JBS Screen 4 bulk -  CS-104L

Kit JBS 5-8 :
Jena Biosciences
JBS Screen 5 bulk -  CS-105L
JBS Screen 6 bulk -  CS-106L
JBS Screen 7 bulk -  CS-107L
JBS Screen 8 bulk -  CS-108L

Kit MDL 1 et 2 :
Molecular dimensions
Kit Structure screen 1 - MD1-01
Kit Structure screen 2 - MD1-02

Kit PEGion/CRYO :
PEGion Screen - Hampton - HR2-126
 
Crystal screen CRYO - Hampton - HR2-122

Kits Nextal : Qiagen
Classic         -  130701
JCSG Core 1 -  130924
JCSG Core 2 -  130925
JCSG Core 3 -  130926
JCSG Core 4 -  130927


La Plateforme met aussi à disposition un certain nombre de kits plus spécifiques :

Additifs HamptonHampton – HR2-428
 
Kit Salt RX HTHampton – HR2108
 
Kit IndexHampton – HR2-144

Kit Proplex - Molecular dimensions  - MD1-38

Kit NatrixHampton – HR2-116


Kits pour protéine membranaire :


Kit Memstart/MemsysMolecular dimensions – MD1-04ROWORLD
 
Kit JBScreen Membrane 1,2,3 :
Jena Biosciences
JBScreen membrane 1 - CS-301L
JBScreen membrane 2 - CS-302L
JBScreen membrane 3 - CS-303L
 
Kit JBScreen Cryo 01 - Jena Biosciences – CC-103
 
Kit MembFacHampton – HR2-114
 
Kit memgold - Molecular dimensions – MD1-39