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L'essai Infinium II

L'essai Infinium II est indiqué pour les projets de génotypage de SNP humains et l'analyse de CNV à large échelle.

Les différents types de lames Illumina

Infinium HD BeadChip Nombre d’échantillons Marqueurs par échantillon Tarif catalogue
par ADN (USD)
Human Omni 2.5 v1.1

8

 

2 379 855

345 $

Human Omni 5 v.1.1 4

4 301 331

603 $
Human Core 12 240 K + custom 103 $
HumanOmni1-Quad 4 > 1 million  
Human1M-Duo 2 > 1 million  
Human660W-Quad 4 > 658000  
HumanCytoSNP-12 12 ~ 300000  
L'essai Infinium II consiste en une réaction d'amplification linéaire isotherme de l'ADN, suivie d'une fragmentation puis d'une hybridation sur billes liées à un oligonucléotide spécifique de 50-mer. Chaque type de bille est présent en 20 exemplaires. Les billes sont identifiées par un système de codage. Après lavage, une réaction enzymatique d'extension d'une base est réalisée en présence de nucléotides marqués. Les nucléotides A et T sont marqués par du dinitrophenol et révélés en fluorescence rouge, les nucléotides C et G sont marqués par la biotine et révélés en fluorescence verte par le iScan.
La détermination de l'orientation du brin d'ADN et du génotype s'appuie sur la méthode « TOP/BOT » développée par Illumina.

L'essai GoldenGate

GoldenGateAssay

La méthode GoldenGate est basée sur l’extension d’un primer spécifique d’un allèle, suivie d’une amplification générique par PCR. 
Les produits sont hybridés sur billes et les cibles fluorescentes sont détectées par le iScan.
 La réaction permet de multiplexer au maximum 1536 SNP sur des lames de 12 ou 32 échantillons.

 
L’ADN (250 ng) est biotinylé puis immobilisé sur des particules traitées à la streptavidine.
L’hybridation se fait en présence de 3 primers : 2 primers spécifiques d’allèles (ASO) et un primer spécifique du locus (LSO).
L’étape suivante inclut une réaction d’extension du ASO vers les LSO, suivie d’une ligation. 
Les produits obtenus sont amplifiés par une PCR générique avec des primers fluorescents, dénaturés puis hybridés sur une puce sur laquelle chaque bille contient une séquence complémentaire de l’Illumicode porté par LSO.